Dal 1947 al 1949 studia al School of the Museum of Fine Arts di Boston, alla Washington and Lee University e al Art Students League di New York dal 1950 al 1951. Lì conosce Robert Rauschenberg che lo accompagna al Black Mountain College, nei pressi di Asheville, nella Carolina del Nord, dove conosce anche John Cage. Twombly è conosciuto per il suo modo di sfuocare la linea tra disegno e pittura. Molte delle sue opere di pittura più note dei tardi anni cinquanta e primi anni sessanta ricordano i graffiti accumulati in anni sui muri delle abitazioni, mentre quelle dei tardi anni Sessanta ricordano delle ‘e’ tracciate in corsivo. A questo punto abbandona la pittura come rappresentazione, citando la linea o macchiando ogni segno con la sua propria storia, come soggetto a sé. Più tardi, molte delle sue pitture e lavori su carta andranno verso il “simbolismo romantico”, e i loro titoli potranno essere interpretati visivamente attraverso forme e parole.